低拷贝模板Str亲子鉴定研究
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低拷贝模板Str亲子鉴定研究

发表日期:2012-12-13 来源:湖南雅湘亲子鉴定咨询中心

作者单位:公安部物证鉴定中心

微量、超微量生物学检材的STR分型常常是案件调查中进行DNA分析的难点。多年来,法医DNA分析工作者一直努力探索对微量DNA进行分析的方法。应用少于试剂盒规定的最小DNA模板量进行STR扩增检验,并对结果加以分析解释,被定义为低拷贝模板(10w copy nmnber,LCN)STR分型。LCN—STR分型不同于标准的STR分型,在实际应用中也存在许多问题需要引起注意{卜5。为了避免在LCN—STR分型中出现误判,本文对如何正确地使用LCN—STR分型技术加以介绍。

1 LCN.slm分型
根据生产厂家的推荐,标准STR分型方法使用最低的模板DNA量应在250pg左右,通常获得最佳效果的DNA量应为Ing,PCR循环数应在28--30以下等最早定义LCN为DNA模板量少于100pg,但Budowle等认为(P【0ceed—ings of the lhh international Symposium of Human Identification,2001),由于DNA定量方法之间存在的差异造成DNA模板量的不同,LCN分型应定义为正常分析随机阂值,如对ProfilerPlus及Cofiler系统用310遗传分析仪检测,其阈值为150或200rfu(rdative fluorescence unit,相对荧光素单位)之下任何结果的分析及解释。当模板DNA的量极少时,PCR扩增就会发生随机效应(stochastic effect)、6,即当DNA模板量低于lOOpg时,在PCR中的前几个循环会对姊妹染色体上DNA分子的一个等位基因随机选择进行扩增,随机扩增的分子在以后会被优先扩增,对杂合子样品的检验结果会造成明显不对称扩增,甚至造成等位基因丢失。所以,在PCR中要规定使用最小的DNA模板量,以避免随机扩增的发生。。对于标准STR分型,峰高或面积被用作避免随机扩增的控制参数,而对于LCN—STR分型,有效的随机阈值却不存在,虽然在检测微量模板DNA时灵敏度提高了,但是得到的DNA分型图谱的质量却下降了,在进行结果分析时必须慎重对待.
小结
LCN—STR分型的成功率较低,有时获得的检验结果可能与案件无关,在实际检验中利用LCN—STR分型必须十分的谨慎,充分注意以下一些方面:(1)一般不作出排除的结论;(2)要进行重复性检验.比较结果;(3)必须设置相应的空白对照;(4)分析结果时没有最小的阈值,必须注意随机效应的存在;(5)等位基因的增多是LCN—sTR中不可避免的问题;(6)必须充分考虑到DNA一级转移及二级转移的情况;(7)杂合子峰的不对称增加;(8)影子带的强度相对增强;(9)无法对混合样品进行分析;(10)在1X2N分型条件下,试剂的质量控制难于进行;(11)必须建立相关的统计学方法对结果进行解释;(12)检验结果的数据不能录入数据库。


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